Aucune étude humaine et seulement quelques études sur des modèles animaux ont étudié l'impact direct du cannabis sur le développement des ovocytes avec des résultats contradictoires 25 , 26 , 27 , 28 , 29 .

Aucune donnée probante !
Les données probantes sont des conclusions tirées de recherches et d'autres connaissances,
validées empiriquement et pertinentes en contexte, servant de fondement solide à la prise de décision,
notamment en santé publique, en éducation ou en psychologie.

Validation empirique :
Il s'agit de s'assurer que les conclusions sont basées sur des preuves concrètes et vérifiables
plutôt que sur de simples spéculations ou des concepts théoriques isolés. Des sondages.

Les joints font pousser les seins des hommes :
Doobies make Boobies !
https://youtu.be/5hBN3RQatY0
La police régionale de York s'est excusée
après avoir diffusé de fausses informations sur le cannabis auprès d'élèves du secondaire,
suggérant notamment que la marijuana favorisait la croissance mammaire chez les hommes.

La recherche a-t-elle été menée sur des êtres humains?

S’il est question des effets positifs ou négatifs d’un aliment ou d’un médicament sur la santé humaine,
il devrait être spécifié que la recherche a été menée sur des humains.
Dans le titre !;O)

En effet, les résultats de tests faits sur des animaux ne peuvent pas systématiquement s’appliquer à l’humain
en raison des différences physiologiques (réactions aux produits chimiques, susceptibilité aux virus, etc.).

De plus, les doses administrées aux animaux peuvent être différentes de celles que l’on donnerait à des humains.
Ainsi que le mode d'administration.

Autrement dit, les résultats de recherche obtenus pour une souris… valent pour une souris!

L’âge des participants aux études doit aussi être pris en compte, car les effets d’un médicament
ou d’un aliment sur l’organisme peuvent différer selon qu’on est jeune ou plus âgé, souligne Dany Plouffe.

Quant aux études faites sur des cellules, elles constituent le point de départ du processus de recherche
et les résultats obtenus pourraient ne jamais s’appliquer à l’humain.

Le cannabis a un impact sur la fertilité féminine, comme le démontrent une étude in vitro et une étude cas-témoins

Titre accrocheur original sans mention de sur la fertilité féminine « animale »:
Le cannabis a un impact sur la fertilité féminine,
comme le démontrent UNE étude in vitro et UNE étude cas-témoins.
Donc pas d'étude longitudinale ni répété par des chercheurs indépendants !?

Science News
THC, a chemical in marijuana, « could » impact women's fertility
THC in marijuana may help eggs become ready for fertilization. But this may
come at the cost of more eggs with wrong numbers of chromosomes.

Nature
Cannabis impacts female fertility as evidenced by an in vitro investigation and a case-control study

Cyntia Duval ,Brandon A. Wyse ,Noga Fuchs Weizman ,Iryna Kuznyetsova ,Svetlana Madjunkova &Clifford L. Librach
Nature Communications volume 16 , Numéro d'article : 8185 ( 2025 )

Citer cet article
Publié:09 septembre 2025

516 Altmetric

Métriquedétails

Abstrait
La consommation et la légalisation du cannabis augmentent à l'échelle mondiale, suscitant des inquiétudes quant à son impact sur la fertilité. Chez l'humain, nous avons précédemment démontré que le tétrahydrocannabinol (THC) et ses métabolites atteignent le follicule ovarien. De nombreuses publications décrivent l'impact du THC sur les spermatozoïdes, mais aucune étude de ce type n'a déterminé ses effets sur l'ovocyte.

Nous étudions ici l'impact du THC sur la fertilité féminine par le biais d'une analyse clinique et in vitro. Dans une étude cas-témoins, nous montrons que la concentration en THC dans le liquide folliculaire est positivement corrélée à la maturation ovocytaire et que les patientes THC-positives présentent des taux d'euploïdie embryonnaire significativement inférieurs à ceux des témoins appariés. In vitro, nous observons une augmentation similaire, mais non significative, du taux de maturation ovocytaire après exposition au THC et une altération de l'expression de gènes clés impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire, l'inflammation et la ségrégation chromosomique. De plus, le THC induit des erreurs de ségrégation chromosomique ovocytaire et augmente la morphologie anormale du fuseau ovarien. Enfin, cette étude met en évidence les risques potentiels associés à la consommation de cannabis pour la fertilité féminine.

Introduction
La consommation de cannabis à des fins médicinales et récréatives ainsi que sa légalisation sont en hausse à l'échelle mondiale 1 . Le cannabis contient plusieurs classes de substances chimiques, les cannabinoïdes étant les plus importants ; parmi ceux-ci, le tétrahydrocannabinol (THC) est le principal composé psychoactif et le plus étudié 2 . Il est à noter que la concentration de THC dans les produits à base de cannabis a considérablement augmenté, passant d'une moyenne de 3 % (en poids) dans les années 1980 à environ 15 % en 2020, certaines souches atteignant 30 % de THC 2 . L'augmentation de la fréquence, de la facilité d'accès et de la puissance soulève des inquiétudes quant à des impacts plus larges sur la santé humaine mondiale, y compris la santé reproductive. En effet, la principale appréhension concernant le THC et la santé reproductive découle de l'importance du système endocannabinoïde dans la reproduction humaine 3 .

Les endocannabinoïdes, dont le N-arachidonoyléthanolamide et le 2-arachidonoylglycérol, sont des cannabinoïdes endogènes qui jouent un rôle central dans la reproduction masculine et féminine 3 , tandis que le THC est un cannabinoïde exogène. Des recherches approfondies ont documenté les effets du THC sur la reproduction masculine, soulignant un impact sur la méthylation de l'acide désoxyribonucléique (ADN) des spermatozoïdes 4 , 5 , 6 , 7 et les paramètres des spermatozoïdes 8 , notamment la concentration des spermatozoïdes 9 , 10 , 11 , la morphologie 12 , 13 , 14 et la motilité 14 . En ce qui concerne la santé féminine, la littérature rapporte l'impact de la consommation de cannabis pendant la grossesse sur l'issue de la grossesse 15 , 16 , 17 , 18 , le développement placentaire 18 , 19 , 20 et la santé de la progéniture 18 , 20 , 21 , 22 . Cependant, à notre connaissance, aucune étude n’a examiné l’impact du cannabis sur le gamète féminin humain, l’ovocyte, une lacune due en partie à la difficulté associée à l’obtention de ces échantillons.

Lors d'une fécondation in vitro (FIV), des gonadotrophines exogènes sont administrées selon un processus appelé « hyperstimulation ovarienne contrôlée », qui recrute de multiples follicules et induit leur croissance. Ces follicules recrutés, contenant chacun un ovocyte, sont ensuite prélevés par un médecin lors d'une procédure appelée ponction ovocytaire. Les ovocytes sont collectés avec leur microenvironnement, notamment le liquide folliculaire (LF) et les cellules somatiques de soutien (cellules de la granulosa). Les ovocytes sont isolés et les ovocytes matures sont utilisés pour une fécondation in vitro ultérieure. Grâce au LF, notre groupe a précédemment quantifié le Δ9-THC et ses métabolites, le 11-OH-THC et le 11-COOH-THC 23 , 24 , démontrant que ces composés pouvaient atteindre la niche folliculaire. Ceci est significatif car cela suggère que le THC pourrait modifier directement le microenvironnement dans lequel l'ovocyte mûrit. Français De plus, notre groupe a montré que l'exposition au THC modifiait la méthylation des cellules de la granulosa humaine d'une manière dépendante de la concentration 23 , et que l'exposition in vitro modulait la dynamique des récepteurs cannabinoïdes dans les cellules de la granulosa 24 . Cependant, aucune étude humaine et seulement quelques études sur des modèles animaux ont étudié l'impact direct du cannabis sur le développement des ovocytes avec des résultats contradictoires 25 , 26 , 27 , 28 , 29 .

La maturation de l'ovocyte est un processus unique et hautement spécialisé qui débute in utero, au cours du développement fœtal. Il est largement admis que les nouveau-nés de sexe féminin naissent avec un nombre fini d'ovocytes qui, après la ménarche, sont recrutés pour mûrir par cohortes à chaque cycle menstruel 30 . Bien que les ovocytes soient protégés dans l'ovaire par la barrière hémato-folliculo-génitale, ils restent très sensibles aux facteurs environnementaux 31 . Compte tenu de leur rôle essentiel dans la reproduction, toute perturbation de leur développement et de leur maturation pourrait avoir des effets profonds sur la fertilité et les générations futures. Par conséquent, comprendre l'impact du THC sur la santé des ovocytes est essentiel pour fournir des conseils éclairés aux patientes quant aux risques potentiels pour leur fertilité et leur future progéniture.

Dans cette étude, nous déterminons l'impact de concentrations physiologiquement pertinentes de THC sur la maturation ovocytaire, élucidons les modifications transcriptomiques induites par l'exposition au THC et son effet sur la ségrégation chromosomique, et comparons nos résultats à ceux d'une étude de cohorte rétrospective. Notre investigation contribuera à combler le manque de connaissances sur les conséquences reproductives de la consommation de cannabis selon le sexe et à améliorer l'efficacité et la pertinence des conseils prodigués aux patients.

Résultats
Les concentrations de THC sont corrélées au taux de maturation dans la FIV
En utilisant une conception rétrospective cas-témoins et la spectrométrie de masse, nous avons quantifié la concentration de Δ9-THC et de ses métabolites, le 11-OH-THC et le 11-COOH-THC, dans le FF de patients suivant un traitement de FIV afin de déterminer les conséquences reproductives de la consommation de THC. La figure 1a illustre la proportion de THC et de ses métabolites mesurée dans tous les échantillons ( n  ​​= 1059). Le taux de positivité a été défini par la présence de 11-COOH-THC dans le liquide folliculaire (62/1059, 6 %). Le 11-COOH-THC a été trouvé seul dans 13 % des échantillons (8/62) tandis que le Δ9-THC a été co-détecté dans 37 % des échantillons (23/62) et le 11-OH-THC co-détecté dans 2 % (1/62). Les trois composés ont été mesurés dans 48 % des échantillons (30/62). Français Parmi les patientes positives, 73 % n'ont pas révélé leur consommation de THC dans le questionnaire d'admission du patient. La distribution du Δ9-THC et de ses métabolites a montré une prédominance du 11-COOH-THC (moyenne = 28,8 ng/mL), suivi du Δ9-THC (moyenne = 7,5 ng/mL), le 11-OH-THC étant le moins abondant (moyenne = 1,7 ng/mL) (Fig. 1b ). Notamment, les concentrations de ces métabolites ne différaient pas entre les échantillons FF et les échantillons de sérum appariés obtenus au moment du prélèvement des ovocytes (Fig. 1c ).

Fig. 1 : Concentrations de tétrahydrocannabinol et corrélation avec les données démographiques et les résultats cliniques de la fécondation in vitro.
figure 1
a Proportion d'échantillons de liquide folliculaire (FF) positifs pour le Δ9-THC, le 11-OH-THC et le 11-COOH-THC (présence de 11-COOH-THC = échantillon positif). b Distribution des concentrations de Δ9-THC ( n  = 53), 11-OH-THC ( n  = 31) et 11-COOH-THC ( n  = 62) dans le FF (données présentées sous forme de médiane avec intervalle interquartile) et c concentrations de Δ9-THC, 11-OH-THC et 11-COOH-THC dans le FF et les échantillons de sérum appariés (données présentées sous forme de moyenne ± écart type, à partir de n  = 3 participants individuels avec des échantillons de sérum appariés (motif de remplissage en pointillés) et des échantillons de FF (uni)). d Matrice de corrélation des paramètres cliniques et biochimiques dans le groupe THC-positif ( n  = 62). Français Les couleurs représentent la valeur ρ de Spearman bilatérale * p  < 0,05, ** p  < 0,01, *** p  < 0,001. AMH Hormone antimüllérienne, IMC Indice de masse corporelle, LH Hormone lutéinisante, FSH Hormone folliculo-stimulante, E2 Estradiol, GT Gonadotrophines, THC Tétrahydrocannabinol, Mat. Taux Taux de maturation des ovocytes, Fert. Taux de fécondation, Blast. Taux de blastulation. Les données sources sont fournies sous forme de fichier de données sources.

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Une analyse de corrélation de Spearman a identifié des corrélations significatives entre les concentrations de métabolites du THC et divers paramètres cliniques et biochimiques (Fig. 1d ). Plus précisément, les concentrations de Δ9-THC, 11-OH-THC et 11-COOH-THC étaient positivement corrélées au taux de maturation des ovocytes dans le groupe THC-positif (Δ9-THC : ⍴ = 0,370, p  = 0,003 ; 11-OH-THC : ⍴ = 0,309, p  = 0,014 et 11-COOH-THC : ⍴ = 0,295, p  = 0,020). Il est intéressant de noter que les niveaux de Δ9-THC étaient négativement corrélés à l'indice de masse corporelle (IMC) d'un patient (⍴ = −0,539, p  = 0,000053).

Exposition in vitro au THC et maturation des ovocytes
Les patientes suivant un traitement de FIV et un prélèvement d'ovocytes, ayant consenti au prélèvement des déchets de FIV (ovocytes immatures, cellules somatiques et FF) et ayant fourni des données cliniques anonymisées, ont été incluses dans cette étude. Pour chaque patiente, un minimum de trois ovocytes immatures au stade de vésicule germinale (VG) ont été prélevés après prélèvement des cellules somatiques. Les ovocytes VG ont été cultivés selon notre protocole standard de maturation in vitro (MIV) pendant 24 h 32 (groupe témoin (CT), n  = 96) ou avec ajout de THC (groupes traités). Les ovocytes ont été traités avec une concentration physiologiquement pertinente (THC1, n  = 95, 25 ng/mL Δ9-THC, 5 ng/mL 11-OH-THC, 50 ng/mL 11-COOH-THC) ou supraphysiologique (THC2, n  = 93, 100 ng/mL Δ9-THC, 50 ng/mL 11-OH-THC, 200 ng/mL 11-COOH-THC) où THC1 est basé sur la concentration de Δ9-THC et de ses métabolites mesurée dans le liquide folliculaire des patientes de FIV et THC2 est basé sur les concentrations précédemment rapportées dans les études animales 23 , 25 , 29 . Français Par la suite, les ovocytes ont été classés en fonction de leur progression à travers les points de contrôle clés de maturation : les vésicules germinales (GV) et la métaphase I (MI) (après la dégradation des vésicules germinales (GVBD) et avant l'extrusion des corps polaires) ont été considérées comme des ovocytes immatures, tandis que les ovocytes de métaphase II (MII) (après l'extrusion visible des corps polaires) ont été considérés comme matures (Fig. 2a ). Le taux de maturation a ensuite été calculé par groupe de traitement.

Fig. 2 : Impact de l’exposition au tétrahydrocannabinol sur la maturation des ovocytes.
figure 2
a Conception expérimentale et maturation des ovocytes in vitro. b Taux de maturation en pourcentage d'ovocytes de vésicules germinales (VG) ayant mûri (ayant progressé vers la métaphase II (MII)) (Ctrl (44/96, THC1 : 49/95, THC2 : 54/93). Diamètre des ovocytes ( c ) avant exposition au THC (Ctrl : n  = 92, THC1 : n  = 89, THC2 : n  = 85) et d après 24 h de culture (Ctrl : n  = 91, THC1 : n  = 88, THC2 : n  = 83). Proportion d'ovocytes ayant subi des événements clés de maturation après 24 h de culture : e dégradation des vésicules germinales (VGV) (Ctrl : n  = 71, THC1 : n  = 72, THC2 : n  = 64) et f extrusion du premier globule polaire (stade arrêté par le MII) (Ctrl : n  = 28, Français THC1 : n  = 30, THC2 : n  = 31). Les barres d'erreur représentent la moyenne ± l'écart type. La signification a été évaluée par un test exact de Fisher bilatéral ou une ANOVA à un facteur avec un test de comparaison multiple de Holm-Sidak bilatéral (ns non significatif). FIV Fécondation in vitro, IVM Maturation in vitro, MII métaphase II, MI métaphase I, GV vésicule germinative, GVBD dégradation des vésicules germinatives, FF liquide folliculaire, THC tétrahydrocannabinol. Les données sources sont fournies sous forme de fichier de données sources.

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Les ovocytes traités avec THC1 n'ont montré aucun changement significatif dans le taux de maturation (49/95, 52 %, p  = 0,6704), tandis que THC2 a montré une tendance non significative vers une maturation accrue (54/93, 58 %, p  = 0,1098), par rapport à Ctrl (44/96, 46 %) (Fig. 2b ). Français En utilisant l'imagerie accélérée, des évaluations de la morphologie des ovocytes ont été réalisées avant l'IVM (Ctrl : n  = 92, THC1 : n  = 89 et THC2 : n  = 85) et après l'IVM (Ctrl : n  = 91, THC1 : n  = 88 et THC2 : n  = 83), et les événements clés de maturation ont été enregistrés : GVBD (Ctrl : n  = 71, THC1 : n  = 72 et THC2 : n  = 64) et extrusion du premier corps polaire (Ctrl : n  = 28, THC1 : n  = 30 et THC2 : n  = 31). Des exemples d'images IVM accélérées sont fournis dans la Fig. 1 supplémentaire et les vidéos correspondantes sont fournies en tant que vidéos supplémentaires (Ctrl-Vidéo supplémentaire 1 , THC1-Vidéo supplémentaire 2 et THC2-Vidéo supplémentaire 3 ). Français Il n'y avait pas de différences significatives dans le diamètre des ovocytes entre les groupes de traitement, ni avant (Ctrl : 110,6 μm, THC1 : 109,6 μm, p  = 0,2120 et THC2 : 109,6 μm, p  = 0,2120) (Fig. 2c ) ni après 24 h de culture (Ctrl : 110,2 μm, THC1 : 110,0 μm, p  = 0,7416 et THC2 : 108,8 μm, p  = 0,1066). (Fig. 2d ). De même, le moment de la GVBD (Fig. 2e ) et de l'extrusion du globule polaire (Fig. 2f ) n'a pas été affecté par l'exposition au THC. Les données démographiques des patients inclus dans ces analyses peuvent être trouvées dans les Informations supplémentaires - Tableau supplémentaire 1 .

L'exposition au THC modifie le transcriptome des ovocytes
Des ovocytes MII uniques présentant une bonne morphologie et une progression développementale normale ont été séquencés à l'aide de notre pipeline optimisé de séquençage d'ARN à très faible entrée 33 ( n  = 24 patients/ n  = 86 ovocytes en métaphase II (MII) (28 Ctrl, 27 THC1 et 31 THC2). L'analyse de l'expression différentielle a révélé que 89 gènes étaient régulés à la hausse et 227 gènes régulés à la baisse plus de 2 fois (|log 2 FC| > 1) et p  < 0,05 (Fig. 3a ) lors de l'évaluation de l'impact du THC1 par rapport à Ctrl (Données supplémentaires 1 ). L'analyse d'enrichissement de l'ensemble de gènes (GSEA) a identifié que les gènes régulés à la hausse étaient principalement associés à la régulation positive de la transmission synaptique, à l'assemblage du complexe de dynéine axonémale et à la voie de signalisation du récepteur du glutamate, tandis que les gènes régulés à la baisse étaient associés à la synthèse des protéines, à la régulation de l'expression de SLITS et ROBOS et aux processus inflammatoires (Fig. 3b , Données supplémentaires 3 ). L'exposition au THC2 a induit une dysrégulation transcriptomique plus importante, avec 402 gènes régulés à la hausse et 62 gènes régulés à la baisse identifiés (Fig. 3c , Données supplémentaires 2 ). Les gènes régulés à la hausse étaient associés au système immunitaire et aux voies apoptotiques, tandis que les gènes régulés à la baisse étaient associés à la fixation des microtubules du fuseau aux kinétochores et aux processus inflammatoires (Fig. 3d , Données supplémentaires 3 ). Comme l'illustre le diagramme de Venn (Fig. 3e ), l'exposition au THC1 a entraîné 266 DEG spécifiques, tandis que l'exposition au THC2 en a entraîné 414, dont 50 étaient communs aux deux groupes de traitement (les listes de gènes sont disponibles dans les Données supplémentaires 4 ). Parmi ces 50 DEG communs, 32 étaient codants pour des protéines, 19 étaient régulés à la hausse ( EPYC, RGS5, N4BP2L1, KRT19, PRR20G, KL, KCND3, Français ALDH3A1, SLC1A3, TSPAN8, PLAU, COL8A2, TFAP2E, SPTSSB, BRINP3, VANGL2, RGS18, RXFP1 et KCNMB3 ), 10 ont été régulés à la baisse ( OR4F15, MMP9, PRRX2, IRS4, INFG, CCIN, IL33, NEUROD1, MT1HL1 et MT1H ) et 3 ont affiché des changements bidirectionnels ( S100B, ACTA1 et ARHGEF19 ) (Fig. 3f ) (Informations détaillées disponibles dans les Données supplémentaires 5 ). Les données démographiques des patients inclus dans ces analyses sont disponibles dans les Informations supplémentaires - Tableau supplémentaire 2 et les mesures de contrôle de la qualité du séquençage sont disponibles dans les Données supplémentaires 6 .

Fig. 3 : Effet de l'exposition au tétrahydrocannabinol sur les transcrits des ovocytes après maturation in vitro des ovocytes.
figure 3
Diagrammes volcaniques des gènes différentiellement exprimés (DEG) comparant ( a ) THC1 vs Ctrl et b analyse de la voie par analyse d'enrichissement de l'ensemble de gènes (GSEA) THC1 vs Ctrl. Diagrammes volcaniques des DEG comparant c THC2 vs Ctrl et d GSEA de la comparaison THC2 vs Ctrl. e Diagramme de Venn des DEG dans THC1 et THC2 comparés à Ctrl. f DEG codant pour des protéines communes, les couleurs représentant le changement de repli. Les DEG ont été définis par p  < 0,05 (test de Wald bilatéral aboutissant à des valeurs de p non ajustées ) et un changement de repli log 2 (|log 2 FC)| > 1, n  = 24 patients/ n  = 86 ovocytes en métaphase II (MII) (28 Ctrl, 27 THC1 et 31 THC2). Les voies significatives ont été définies comme ayant un score d'enrichissement normalisé (|NES|) > 1,5 et p  < 0,05 (test de permutation bilatéral aboutissant à des valeurs p non ajustées ).

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Le THC est nocif pour la ségrégation des chromosomes
Des sous-ensembles d'ovocytes MII provenant des groupes témoins et traités au THC ont été utilisés pour évaluer le statut de ploïdie du globule polaire (18 Ctrl, 21 THC1 et 21 THC2) et la morphologie du fuseau (12 Ctrl, 12 THC1 et 12 THC2). L'ablation de la zone pellucide (ZP) et la biopsie ultérieure du globule polaire (Fig. 2 supplémentaire ) ont permis d'utiliser certains ovocytes pour la détermination de la ploïdie par séquençage de nouvelle génération du génome entier passe-bas (NGS) aneuploïdie en utilisant VeriSeq PGT-A qui est spécialisé dans la détection de l'aneuploïdie dans les échantillons reproductifs 21 , 34 (Fig. 3 supplémentaire ) et l'organisation du fuseau méiotique par microscopie confocale permettant une visualisation précise de l'organisation du fuseau et de l'alignement des chromosomes (Fig. 4a ). Français Les traitements au THC1 et au THC2 ont tous deux entraîné une augmentation de 9 % de l'aneuploïdie (Ctrl : 39 %, THC1 et THC2 : 48 %, p  = 0,7479) (Fig. 4b ) et une proportion plus élevée d'aneuploïdie complexe, définie par le gain ou la perte de plus de trois chromosomes 35 (Ctrl : 0 %, THC1 et THC2 : 42 %, p  = 0,1029) (Fig. 4c ). La figure 4d présente un sous-ensemble d'ovocytes où le statut de ploïdie et la morphologie du fuseau ont été évalués ( n  = 17), sans stratification par groupe de traitement. La majorité des ovocytes ayant terminé la méiose I présentaient une morphologie du fuseau normale (euploïde : n  = 8/13, 62 % et aneuploïde : n  = 3/4, 75 %, p  > 0,9999) (Fig. 4d ), mais pas tous. Les caractéristiques distinctives des fuseaux méiotiques « normaux » comprennent des microtubules bipolaires en forme de tonneau, dont les chromosomes sont alignés sur la plaque métaphasique 36 . Les fuseaux « anormaux » présentent quant à eux une morphologie variée et peuvent inclure des fuseaux multipolaires, des altérations de l'organisation des microtubules et des chromosomes mal alignés 36 . La désorganisation du fuseau et le mauvais alignement des chromosomes sont illustrés par des images représentatives de la figure 4e , où les ovocytes ont été classés comme ayant des fuseaux « normaux » ou « anormaux ». La proportion d'ovocytes présentant des fuseaux anormaux était plus élevée dans les groupes exposés au THC que dans les groupes témoins (CT (5/12), THC1 8/12) et THC2 (11/12), avec une augmentation significative de THC2 (CT : 42 % et THC2 : 92 %, p  = 0,0272) (figure 4f ). (Des témoins négatifs à l'immunomarquage du fuseau sont disponibles dans la figure supplémentaire 4 ).

Fig. 4 : Impact de l’exposition au tétrahydrocannabinol sur la morphologie du fuseau ovocytaire et le statut de ploïdie.
figure 4
a Plan expérimental pour le séquençage des globules polaires et l'immunomarquage des ovocytes. b Proportion d'ovocytes euploïdes déduite par les résultats du séquençage de la biopsie des globules polaires dans Ctrl (11/18), THC1 (11/21) et THC2 (11/21). c Proportion d'ovocytes aneuploïdes avec un gain/perte d'un chromosome (blanc), deux chromosomes (gris) ou trois et plus (noir) dans Ctrl (1 chromosome : n  = 4, 2 chromosomes : n  = 3, ≥ 3 chromosomes : n  = 0, total n  = 7), THC1 (1 chromosome : n  = 2, 2 chromosomes : n  = 4, ≥ 3 chromosomes : n  = 4, total n  = 10) et THC2 (1 chromosome : n  = 4, 2 chromosomes : n  = 2, ≥ 3 chromosomes : n  = 4, total n  = 10). d Proportion de fuseaux morphologiques normaux dans les ovocytes euploïdes (8/13) et aneuploïdes (3/4). e Images représentatives de fuseaux ovocytaires normaux ( n  = 12) et anormaux ( n  = 24) arrêtés en métaphase II, les chromosomes (Hoechst) sont en bleu, les fuseaux (α-tubuline) sont en vert et la membrane cellulaire (phalloidine) en rouge. Barre d'échelle : 5 µm. f Proportion d'ovocytes avec des fuseaux anormaux dans Ctrl (5/12), THC1 (8/12) et THC2 (11/12, p  = 0,0272). La signification a été évaluée à l'aide du test exact bilatéral de Fisher. GV vésicule germinale, MI métaphase I, MII métaphase II, Oo ovocyte, PB corps polaire, THC tétrahydrocannabinol, WGA amplification du génome entier, ZP zone pellucide. Les données sources sont fournies sous forme de fichier de données sources.

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Le THC diminue le taux d'euploïdie embryonnaire en FIV
Après une comparaison cas-témoins par paires, où chaque échantillon positif au THC a été comparé à deux échantillons négatifs au THC, une diminution significative du taux d'euploïdie embryonnaire a été observée dans le groupe positif au THC ( n  = 51, 60,0 %), par rapport au groupe négatif au THC ( n  = 101, 67,0 %, p  = 0,0245) (Tableau 1 ). Il n'y a pas eu de changement significatif dans les taux de maturation, de fécondation et de blastocystes (Tableau 1 ).

Tableau 1 Données démographiques et résultats de la fécondation in vitro de patients appariés par paires négatifs et positifs au tétrahydrocannabinol
Table pleine grandeur
Pour évaluer plus en détail la probabilité de résultats indésirables de la FIV, nous avons effectué des analyses de régression logistique multiple, en nous concentrant sur les seuils de résultats de la FIV cliniquement pertinents 37 : taux de maturation (80 %), taux de fécondation (70 %), taux de blastocystes (50 %) et taux d'euploïdie (60 %). Nous avons utilisé une régression logistique pas à pas rétrograde, incluant les covariables suivantes : âge de l'ovocyte, indice de masse corporelle (IMC) de la participante, hormone antimüllérienne (AMH), hormone lutéinisante (LH) et hormone folliculo-stimulante (FSH) au jour 2/3, (estradiol) E2 sur le déclencheur et dose totale de gonadotrophine (GT). Le modèle final pour les taux de blastulation et d'euploïdie a retenu le statut du THC comme variable explicative significative, l'âge de l'ovocyte étant une covariable significative. Français Dans cette cohorte appariée par paires, la positivité au THC a significativement diminué les chances d'atteindre un taux de blastulation de 50 % ou plus (rapport de cotes : 0,45, p  = 0,018) et les chances d'atteindre un taux d'euploïdie supérieur à 60 % (rapport de cotes : 0,47, p  = 0,038) (Tableau 2 ). L'âge s'est également avéré avoir un impact significatif sur les taux de blastulation et d'euploïdie, avec un rapport de cotes de 0,9144 ( p  = 0,0010) et 0,9150 ( p  = 0,0024), respectivement. Les modèles de prédiction du taux de blastulation (> 50 %) et du taux d'euploïdie (> 60 %) ont démontré un pouvoir prédictif positif, avec des aires sous la courbe (ASC) de 0,68 et 0,67, respectivement (Fig. supplémentaire 5 ).

Tableau 2 Modèles de régression logistique multiple pour les taux de blastulation et d'euploïdie
Table pleine grandeur
Discussion
Comprendre l'impact des facteurs environnementaux et des choix de vie sur la fertilité féminine est essentiel pour un accompagnement personnalisé des patientes. Le cannabis étant l'une des drogues récréatives les plus consommées au monde 1 , il est essentiel d'évaluer de manière globale son impact sur la santé mentale et générale, ainsi que sur la santé reproductive. Cette étude, utilisant des ovocytes humains donnés et une approche multidisciplinaire intégrée, révèle que l'exposition au THC affecte la maturation ovocytaire et le transcriptome, et induit des déséquilibres chromosomiques méiotiques associés à une altération de la morphologie du fuseau. De plus, notre analyse rétrospective a révélé que l'exposition au THC était associée à un taux d'euploïdie embryonnaire significativement plus faible, probablement en partie expliqué par une altération de l'organisation chromosomique, comme démontré dans les ovocytes MII matures in vitro.

Dans notre étude rétrospective, nous avons mesuré les concentrations de THC dans 1059 échantillons de liquide folliculaire provenant de patientes suivant un traitement de FIV au CReATe Fertility Centre (Toronto, Canada) dans une cohorte rétrospective cas-témoins appariée. Soixante-deux échantillons ont été testés positifs au 11-COOH-THC, ce qui donne un taux de positivité de 6 % (Fig. 1a ). Ce taux est considérablement inférieur à celui rapporté par une récente enquête de Santé Canada où 23 % des femmes ont déclaré avoir consommé du cannabis à des fins récréatives dans l'année suivant l'enquête 38 . Cependant, ces patientes ont été avisées avant le traitement de ne pas consommer de drogues récréatives pendant la FIV. Les concentrations relatives de Δ9-THC, 11-OH-THC et 11-COOH-THC sont cohérentes avec le métabolisme du THC dans le foie (Fig. 1b ). Français Le Δ9-THC (demi-vie de 1,3 à 10 jours) est métabolisé en 11-OH-THC (demi-vie de 20 min à 2 h) et le 11-OH-THC est rapidement métabolisé en 11-COOH-THC (demi-vie de 3 à 5 jours), qui reste dans la circulation jusqu'à 30 jours 39 . Les concentrations constantes de métabolites du THC dans le liquide folliculaire et le sérum suggèrent une diffusion passive ou une transsudation de la circulation sanguine dans le liquide folliculaire plutôt qu'un transport actif dans ou hors du follicule (Fig. 1c ).

Dans un contexte clinique de FIV, les embryologistes et les médecins évaluent les ovocytes matures en fonction de l'extrusion du premier globule polaire 30 , 40 . Ce processus, connu sous le nom de maturation nucléaire, marque la progression de l'ovocyte vers la métaphase II et est considéré comme le stade final de la maturation ovocytaire 30 , 41 . Lorsque nous avons compilé les résultats de FIV de notre cohorte rétrospective, nous avons observé une corrélation positive entre les métabolites du THC et la maturation ovocytaire (Fig. 1d ). Cela suggère que les niveaux de THC et de ses métabolites présents dans cette cohorte pourraient soutenir la maturation nucléaire par un mécanisme inconnu.

Parallèlement à notre étude clinique rétrospective, nous avons traité des ovocytes immatures appariés par paires provenant de patientes négatives au THC (GV naïves) avec du THC in vitro et nous avons observé une proportion accrue d'ovocytes ayant atteint le stade MII (Fig. 2b ). Étant donné que des facteurs tels que le diamètre des ovocytes ont été précédemment rapportés comme influençant la maturation nucléaire 42 , nous avons confirmé qu'il n'y avait aucune différence dans la distribution de la taille des ovocytes entre les trois groupes (Ctrl, THC1 et THC2) avant et après une culture de 24 h (Fig. 2 c, d). Enfin, nous avons également surveillé et enregistré le moment des événements clés de maturation à l'aide de la technologie d'imagerie accélérée et avons montré que la GVBD se produisait légèrement plus rapidement dans les ovocytes traités au THC (Fig. 2e ), mais cela n'était pas significatif, et il n'y avait aucune différence dans le moment de la première extrusion du globule polaire entre les groupes exposés au THC et Ctrl (Fig. 2f ). Français Des études animales antérieures ont étudié l'impact du THC sur la maturation des ovocytes en utilisant des ovocytes bovins 29 , qui sont considérés comme un meilleur indicateur de la maturation des ovocytes humains par rapport au modèle murin en raison d'une dynamique temporelle similaire. López-Cardona et al. ont signalé une augmentation de 15 % du taux de maturation après avoir traité les ovocytes avec 0,1 µM (31,45 ng/mL) de Δ9-THC pendant 12 h ( n  = 30/groupe) 29 . Français En revanche, une étude plus récente et plus vaste ( n  = 164/groupe) a conclu qu'un traitement de 24 heures avec des « doses de cannabis récréatif » de 0,32 µM (100,63 ng/mL) et 3,2 µM (1 006,30 ng/mL) de Δ9-THC réduisait significativement la maturation des ovocytes de 80,1 % à 65,3 % et 60,1 %, respectivement 25 . Il est à noter que cette dernière étude a utilisé des doses plus élevées de Δ9-THC que celles mesurées dans le FF de nos patients, mais aucune des deux études n'a examiné les effets combinés du Δ9-THC et de ses métabolites, ce qui pourrait modifier son effet sur l'ovocyte en croissance. Collectivement, nos résultats suggèrent que l’exposition au THC, à des concentrations physiologiques et supraphysiologiques, semble accélérer la vitesse de maturation et l’achèvement des ovocytes, conformément aux résultats de l’étude bovine Lόpez-Cardona 29 et des études antérieures sur la souris 26 .

Les ovocytes doivent non seulement progresser avec succès à travers la méiose II pour atteindre la métaphase II, mais ont également besoin de suffisamment de temps pour atteindre la maturité cytoplasmique pour soutenir le développement précoce de l'embryon 30 , 41 . Ce processus implique l'emballage précis et fidèle de divers composants, y compris les transcrits d'ARNm maternels. La production et le stockage d'ARNm dans l'ooplasme sont essentiels, car, après l'établissement de la vésicule germinale, la chromatine est condensée et la transcription est arrêtée 43 , 44 . Ces transcrits sont essentiels non seulement pour la reprise de la méiose et la fécondation, mais aussi pendant les 3 premiers jours du développement embryonnaire 45 , car l'embryon précoce reste transcriptionnellement silencieux, s'appuyant entièrement sur l'ARNm hérité de la mère de l'ooplasme pour piloter les processus cellulaires avant l'activation du génome embryonnaire 46 . La sélection et l'enrichissement des transcrits critiques dans l'ooplasme ont été décrits dans la littérature et sont régulés par des mécanismes post-transcriptionnels. Ces processus complexes impliquent un réseau sophistiqué de protéines de liaison à l’ARN (RBP), de facteurs de polyadénylation et de mécanismes de traduction et de dégradation de l’ARN, qui régulent tous le stockage, la traduction et la dégradation des ARNm des ovocytes 46 .

Afin de comprendre comment le THC affecte l'ARNm maternel stocké pendant la maturation des ovocytes, nous avons identifié des gènes associés à des transcrits exprimés différemment après exposition au THC (Fig. 3 a, c). En nous concentrant sur les transcrits codant pour des protéines communes, 32 gènes ont été identifiés et regroupés en neuf fonctions principales : signalisation des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG), régulation de la matrice extracellulaire, embryogenèse, communication intercellulaire, inflammation, cytosquelette, détoxification, facteur de transcription et canaux ioniques (Données supplémentaires 5 ).

Parmi ceux-ci, MMP9 a été significativement régulée à la baisse dans les deux groupes de traitement au THC. MMP9 code pour la métalloprotéinase matricielle 9 (MMP-9) essentielle à la protéolyse locale de la matrice extracellulaire et à la migration des leucocytes 47 , 48 , 49 . Dans les modèles animaux, MMP-9 a un rôle bien établi dans l'ovulation et la rupture folliculaire 50 , 51 , 52 , et chez la souris, l'expression de la protéine dans le blastocyste et l'embryon précoce est essentielle à l'implantation 53 , 54 , 55 , 56 , 57 , 58 . Chez l'homme, plusieurs études ont étudié son rôle dans l'implantation en utilisant divers modèles de trophoblaste et d'implantation 59 , 60 , 61 . La dysrégulation de son expression et de son activité est associée à des complications de la grossesse et à des fausses couches à répétition 62 , 63 , 64 , 65 . De plus, il a également été démontré que le THC diminue l'expression de MMP-9 dans l'épithélium amniotique humain 66 et les cellules cancéreuses endothéliales 67 . Ainsi, la régulation négative de MMP9 dans l'ooplasme peut contribuer négativement aux événements clés de l'ovulation nécessaires à la fécondation, au développement de l'embryon et à l'implantation.

La signalisation des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) a également été dérégulée après une exposition au THC. La signalisation des GPCR est cruciale pour la croissance et la maturation des ovocytes, et de nombreux GPCR sont présents à la surface des ovocytes, y compris les récepteurs cannabinoïdes 1 (CB1) et 2 (CB2) 27 , 68 . Les gènes codant pour les régulateurs de la signalisation des protéines G (RGS), RGS5 et RGS18 , ont été significativement régulés à la hausse après un traitement au THC dans notre étude. Ces régulateurs sont connus pour moduler la transduction du signal des GPCR 69 . RGS5 et RGS18 appartiennent à la famille RGS R4 et il a été démontré qu'ils se lient aux protéines Gα, réduisant ainsi leur activité inhibitrice 70 , 71 . Il a été démontré qu'ils jouent un rôle crucial dans le traitement cellulaire du signal provenant des GPCR 72 . Bien que le rôle exact de RGS5 et RGS18 dans la maturation des ovocytes soit mal compris, leur régulation positive suggère un impact potentiel sur les voies de signalisation des GPCR en réponse à la stimulation par le THC.

Les voies immunitaires étaient également surreprésentées dans les deux groupes de traitement par rapport aux témoins. Par exemple, l'IFNG et l'IL33 étaient tous deux significativement régulés à la baisse dans les groupes exposés au THC. Il est bien établi qu'une régulation stricte des processus inflammatoires est essentielle à l'implantation de l'embryon dans l'endomètre 73 . L'interféron-γ (IFNγ) est une cytokine largement connue pour son rôle dans l'inflammation et l'activation des macrophages 74 . Bien que son rôle pendant la maturation des ovocytes ne soit pas clair, la sécrétion d'IFNγ par le conceptus est essentielle à l'implantation dans les modèles animaux 75 . D'autre part, l'interleukine-33 (IL-33), une cytokine qui appartient à la famille de l'IL-1, se lie au récepteur ST2 (IL-1RL1) 76 . Chez la souris, l'IL-33 s'est avérée exprimée dans l'ovocyte et le ST2 dans les cellules de la granulosa et l'utérus 77 . Chez l'homme, des niveaux ou une expression altérés d'IL-33 ou de ST2 dans divers types de tissus et d'échantillons ont été associés à des complications de la grossesse comme la prééclampsie 78 , 79 , 80 , la naissance prématurée 81 , 82 , 83 , le retard de croissance intra-utérin 84 et la fausse couche 85 . La régulation négative de l'IL-33 que nous avons observée dans les ovocytes exposés au THC suggère qu'il pourrait y avoir une perturbation potentielle des processus inflammatoires nécessaires à une grossesse réussie.

Un nombre significatif de DEGs dans les ovocytes exposés au THC sont impliqués dans la fonction cytosquelettique, notamment KRT19, COL8A2, ACTA1 et ARHGEF19 (Données supplémentaires 5 ). Outre ces modifications transcriptomiques, nous avons observé des altérations significatives de la machinerie du cytosquelette tout au long de cette étude. En effet, le cytosquelette de l'ovocyte joue un rôle crucial dans l'alignement, la ségrégation et l'établissement de la polarité des chromosomes 86 et, sans formation et régulation appropriées des fonctions cytosquelettiques clés, l'ovocyte est vulnérable aux anomalies chromosomiques. Cependant, les DEGs associés au cytosquelette identifiés dans cette étude n'ont pas été caractérisés auparavant dans le développement des ovocytes et nécessitent donc des recherches plus approfondies pour mieux comprendre les effets du THC sur ces processus.

Dans l'ensemble, l'exposition au THC semble avoir un impact sur les transcrits essentiels impliqués dans les processus clés de maturation des ovocytes, la fécondation, le développement embryonnaire précoce et l'implantation. Bien que ces altérations transcriptomiques résultent probablement de processus post-transcriptionnels, les mécanismes spécifiques par lesquels le THC affecte ces processus dans les ovocytes humains restent inconnus 46 .

Compte tenu de l'augmentation observée du taux de maturation nucléaire et des profils transcriptomiques altérés liés à l'organisation des chromosomes, nous avons ensuite étudié l'impact du THC sur la ségrégation des chromosomes. En effet, les erreurs de ségrégation des chromosomes au cours de la première division méiotique sont la cause la plus fréquente d'aneuploïdie embryonnaire 87 , ce qui fait de l'établissement fidèle de la machinerie de ségrégation des chromosomes un goulot d'étranglement critique dans la production d'un embryon chromosomiquement normal 88 , 89 . Pour étudier la ploïdie des ovocytes, nous avons effectué une biopsie du globule polaire et un séquençage passe-bas du génome entier. Nous avons notamment observé que l'exposition au THC entraînait une augmentation de 9 % des taux d'aneuploïdie (Fig. 4b ). De plus, nous avons observé une augmentation de la proportion d'ovocytes présentant des aneuploïdies complexes (définies comme un gain ou une perte de 3 chromosomes ou plus) 35 dans le groupe traité au THC par rapport aux témoins (Fig. 4c ). Français Les aneuploïdies sont associées à un échec d'implantation, à une fausse couche et sont incompatibles avec la vie 90 . Il a été postulé que la plupart des aneuploïdies proviennent d'erreurs dans la méiose maternelle I 91 , 92 , 93 , 94 , 95 , 96 , mais nos données suggèrent que la méiose II peut également être sensible aux perturbations puisque 38 % des ovocytes euploïdes présentaient une morphologie anormale du fuseau (Fig. 4d ) déterminée par microscopie confocale. Nous avons évalué la morphologie du fuseau après 24 h d'incubation des ovocytes avec et sans THC. Une configuration normale du fuseau est en forme de tonneau avec des chromosomes alignés sur la plaque métaphasique, tandis que les configurations « anormales » incluent des fuseaux multipolaires et des chromosomes mal alignés 97 (Fig. 4e ). Dans cette étude, nous avons démontré une diminution dose-dépendante de la proportion d'ovocytes ayant une morphologie normale du fuseau après exposition au THC (Fig. 4f ). Une ségrégation correcte des chromosomes pendant la maturation des ovocytes est essentielle pour produire des embryons euploïdes, qui ont les plus grandes chances d’établir une grossesse saine 98 .

Pour répondre à la question clinique principale concernant l'impact du THC sur les résultats de la FIV, nous avons utilisé une stratégie d'appariement cas-témoins par paires, où chaque échantillon positif a été apparié à deux échantillons négatifs en fonction des données démographiques, et nous avons compilé les résultats de la FIV de la cohorte appariée résultante (Tableau 1 ). L'exposition au THC a été associée à une augmentation marginale du taux de maturation (Tableau 1 ), concordant avec ce qui a été obtenu dans nos expérimentations in vitro (Fig. 2b ). De plus, une diminution significative du taux d'euploïdie embryonnaire (Tableau 1 ) et une réduction des chances d'obtenir un taux d'euploïdie supérieur à 60 % ont été observées (Tableau 2 ). Ces résultats indiquent que les patientes positives au THC peuvent avoir moins d'embryons euploïdes issus de leur cycle de FIV et peuvent connaître un délai de grossesse plus long.

Pour approfondir notre compréhension de nos résultats, nous devons extrapoler ce que l'on sait des interactions et des voies du THC à partir d'autres types de cellules. Le THC exerce principalement ses fonctions en se liant aux récepteurs cannabinoïdes 1 et 2 (CB1 et CB2), qui sont exprimés à tous les stades de la maturation des ovocytes 68 . CB1 et CB2 sont des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) capables d'inhiber l'adénylate cyclase, l'enzyme responsable de la catalyse de l'adénosine triphosphate (ATP) en adénosine 3', 5'-monophosphate cyclique (AMPc). L'activation des récepteurs CB, par stimulation par le THC, pourrait ainsi conduire à une inhibition de l'adénylate cyclase, entraînant une diminution des taux d'AMPc dans l'ooplasme 99 . L'activité de l'adénylate cyclase et la production constante et élevée d'AMPc sont essentielles pour prévenir une reprise méiotique prématurée 100 . Nous proposons ici un modèle hypothétique d'action du THC dans lequel le THC se lie aux CB1/2, les activant, ce qui inhibe à son tour l'activité de l'adénylate cyclase, réduisant ainsi la concentration d'AMPc dans l'ooplasme. La levée de l'inhibition de la reprise méiotique entraînerait alors une reprise prématurée de la méiose. Cette reprise intempestive et prématurée pourrait augmenter le risque d'aneuploïdie dans l'ovocyte et l'embryon résultant, en raison de la séparation prématurée des chromosomes mal alignés sur la plaque métaphasique et d'une division asymétrique des chromosomes dans le premier globule polaire. Cette hypothèse concorde avec la corrélation entre les concentrations de THC et le taux de maturation des ovocytes observée dans la cohorte rétrospective (Fig. 1d ) et l'augmentation du taux de maturation des ovocytes in vitro, ainsi que la réduction associée des ovocytes euploïdes (Fig. 4b ) et des taux d'embryons euploïdes (Tableau 1 ) que nous avons observée. D'autres recherches sont en cours pour approfondir la signalisation du THC dans l'ovocyte et affiner ce modèle hypothétique.

En conclusion, cette étude examine et démontre de manière exhaustive l'impact du THC sur l'ovocyte humain. Nos résultats révèlent des effets significatifs sur la maturation ovocytaire, les profils transcriptomiques, l'organisation du fuseau méiotique et la ploïdie ovocytaire. Collectivement, ces données démontrent de manière convaincante que la consommation de cannabis peut avoir un impact négatif sur la fertilité féminine. Notre approche in vitro intégrée et multidimensionnelle, utilisant plusieurs techniques et critères d'évaluation pour évaluer la ségrégation chromosomique, constitue un atout majeur de cette étude. Cependant, elle était limitée par l'utilisation d'ovocytes GV immatures après hyperstimulation ovarienne, considérés comme sous-optimaux pour la reproduction, car ils n'ont pas atteint leur maturité après la stimulation initiale. De plus, nous reconnaissons l'importance de l'âge des patientes sur la capacité des ovocytes à mûrir in vitro, mais cette étude ne disposait pas de la puissance statistique nécessaire pour analyser les résultats en fonction de l'âge des patientes. Cette limitation est due au fait que la majorité des ovocytes GV ont été prélevés chez des patientes de moins de 37 ans (81 %). De plus, notre étude s’est concentrée sur l’identification des changements dans l’abondance des transcrits pré-stockés en réponse à l’exposition au THC, plutôt que sur la transcription de novo, limitant ainsi notre capacité à spéculer sur l’impact du THC sur l’expression des gènes avant le stade GV.

D'autre part, notre cohorte rétrospective a mesuré objectivement le THC et ses métabolites afin de déterminer l'impact du THC sur les résultats de la FIV, surmontant ainsi les biais inhérents à l'auto-déclaration 101 . En effet, 73 % de nos patients positifs au THC n'ont pas déclaré avoir consommé du cannabis lors du remplissage de leur questionnaire d'admission, potentiellement en raison de la stigmatisation persistante de la consommation de drogues récréatives. Une limite de notre étude rétrospective est le manque de données sur les habitudes de consommation de cannabis (par exemple, fréquence, moment, dosage, voie de consommation), et notre cohorte n'est probablement pas représentative de la population générale, car tous les patients subissaient une FIV pour un traitement de fertilité ou pour donner altruiste leurs ovocytes à leurs futurs parents. De plus, la présence d'autres drogues n'a pas été mesurée dans le FF, et même si aucun des patients n'a déclaré une consommation concomitante d'autres drogues, l'auto-déclaration seule ne peut pas exclure l'exposition du follicule à ces substances. Les limites associées à l’aspect rétrospectif de cette étude et aux autres contributeurs potentiels (par exemple les habitudes de vie) aux résultats observés sont compensées par notre étude in vitro qui a utilisé au moins trois ovocytes (un dans chaque groupe d’exposition) par patiente.

Enfin, ces résultats soulignent la nécessité d'une sensibilisation accrue et d'une plus grande prudence chez les personnes ayant des ovaires, en particulier celles suivant des traitements de fertilité. Notre étude souligne l'importance d'informer les patientes des risques potentiels liés à la consommation de cannabis et fournit une base aux organismes de réglementation, aux sociétés professionnelles médicales et aux organismes de santé publique pour établir des recommandations et des lignes directrices concernant la consommation de cannabis pendant les traitements de fertilité.

Méthodes
Approbation éthique et licences réglementaires pour le cannabis
Toutes les patientes bénéficiant d'une procréation médicalement assistée (PMA) ont eu la possibilité de participer à la collecte et à l'utilisation future de déchets biologiques à des fins de recherche. Un formulaire de consentement éclairé, approuvé par un comité d'examen indépendant (CEI), contenant des informations sur les types de matériel qui seraient collectés après consentement, ainsi que des exemples de projets pour lesquels ce matériel pourrait être utilisé, a été remis aux patientes. Aucune compensation ni avantage financier n'a été perçu pour leur participation à la collecte de déchets biologiques. Toutes les patientes incluses dans cette étude ont donné leur consentement éclairé pour le don de leurs déchets biologiques, comprenant du liquide folliculaire (FF) et des ovocytes immatures (GV), ainsi que des informations démographiques et cliniques anonymisées, notamment l'âge, l'indice de masse corporelle (IMC), les paramètres de la réserve ovarienne et les schémas thérapeutiques (approbation Veritas du CEI n° 16487). Pour être incluses dans l'évaluation du tétrahydrocannabinol (THC) sur la maturation in vitro (MIV), les patientes devaient avoir eu 10 ovocytes MII ou plus après stripping et un minimum de 3 ovocytes GV afin d'avoir au moins un ovocyte GV par groupe de traitement. Enfin, toutes les patientes incluses dans l'évaluation du THC sur la MIV ont été confirmées négatives pour le THC par LC-MS/MS (décrit ci-dessous). Les patientes étaient exclues si : elles ne répondaient pas aux critères d'inclusion, avaient un faible rendement ovocytaire (< 16 ovocytes), un faible taux de maturation ovocytaire (< 62,5 %), un cycle précédent avec un faible taux de fécondation (< 75 %) et/ou un faible taux de blastulation (< 40 %), un facteur masculin sévère, un âge maternel avancé (> 40 ans), ou qui suivaient une préservation de la fertilité (oncofertilité et/ou congélation d'ovules pour des raisons sociales). De plus, si une patiente avait consenti au don de ses déchets biologiques, mais que le médecin et l'embryologiste estimaient qu'une MIV de sauvetage (rIVM) était indiquée pour ses soins cliniques, aucun ovocyte ne serait prélevé à des fins de recherche et les patientes seraient informées de l'ajout de la rIVM à leur traitement clinique par le médecin ou un autre professionnel de santé. Tous les ovocytes GV inclus dans cette étude ont été prélevés et ont subi une MIV entre juillet 2022 et janvier 2024. La demande et l'utilisation d'échantillons et de données démographiques et cliniques anonymisées pour cette étude ont été approuvées par l'IRB Veritas (approbation n° 16518). Pour l'analyse rétrospective, les FF ont été prélevés auprès de toutes les patientes consentantes ayant suivi un traitement de FIV entre juin 2016 et mars 2023. Tous les échantillons de cette étude ont été considérés comme « féminins » car il s'agissait d'ovocytes humains chromosomiquement « XX ». Le sexe, la race, l'origine ethnique ou d'autres groupes socialement pertinents n'ont pas été pris en compte dans cette étude. L'achat, le stockage et l'utilisation du Δ9-THC et de ses métabolites à des fins de recherche ont été approuvés par Santé Canada et toutes les procédures ont été menées conformément à la « Loi sur le cannabis » et au « Règlement sur le cannabis » (Licence n° LIC-A4MUR820SB-2020).

Détection d'exocannabinoïdes dans FF
Des mesures de Δ9-THC, 11-OH-THC et 11-COOH-THC dans le FF ont été effectuées pour chaque patient ayant donné des ovocytes GV, comme décrit précédemment, afin d'exclure les patients consommant du cannabis pour l'investigation IVM 23 . Pour l'étude rétrospective, le FF et le sérum apparié ont été mesurés en utilisant la même procédure. Brièvement, les protéines ont été précipitées à l'aide de méthanol (1:1 v/v), et les surnageants ont été évalués par LC-MS/MS en utilisant un QTRAP 5500 (SCIEZ, Concord, CA, États-Unis) et un HPLC Agilent 1290 (Agilent, Santa Clara, États-Unis) avec une courbe d'étalonnage (0,001–200 ng) d'une quantité connue des molécules d'intérêt. Les échantillons au-dessus de la limite inférieure de quantification ont été considérés comme positifs. Le cannabinol (CBN) et le cannabidiol (CBD) ont également été mesurés dans les échantillons, mais étaient indétectables.

Maturation in vitro des ovocytes
Des ovocytes GV ont été reçus de patientes consentantes, répartis aléatoirement en trois groupes et cultivés à l'aide de milieux IVM cliniques standard (SAGE One-step (CooperSurgical, Canada) + 7,5 UI/mL de Menopur (Ferring, Canada)) : Ctrl ( n  = 96, uniquement milieux IVM), THC1 ( n  = 95, traités avec une concentration physiologique de cannabis basée sur des mesures antérieures de cannabis dans FF 23 : 25 ng/mL Δ9-THC (Sigma-Aldrich, Canada), 5 ng/mL 11-OH-THC (Sigma-Aldrich, Canada), 50 ng/mL 11-COOH-THC (Sigma-Aldrich, Canada)) et THC2 ( n  = 94, traités avec du THC à une concentration basée sur des études animales antérieures 25 , 27 , 29 : 100 ng/mL Δ9-THC, Français 50 ng/mL 11-OH-THC, 200 ng/mL 11-COOH-THC). Les ovocytes ont été obtenus auprès de 24 patientes et leurs données démographiques sont présentées dans le tableau supplémentaire 1. Des images à l'aide d'un microscope à champ clair inversé ont été prises avant et après l'incubation pour évaluer la morphologie des ovocytes. Les ovocytes ont été cultivés pendant 24 h à l'aide du système d'imagerie EVOS FL Auto 2 (ThermoFisher, Canada) ou d'un incubateur de culture cellulaire (5 % de CO 2 et 37 °C). Des images en accéléré ont été prises toutes les 15 min et utilisées pour l'évaluation de la GVBD et de l'extrusion des globules polaires (Ctrl : Vidéo supplémentaire 1 , THC1 : Vidéo supplémentaire 2 et THC2 : Vidéo supplémentaire 3 ). Après 24 h de culture, les ovocytes ont été traités selon le critère d'évaluation spécifique (RNAseq ou immunocoloration/biopsies des globules polaires).

Séquençage de l'ARNm d'un seul ovocyte
Les ovocytes destinés au RNASeq unicellulaire ont été débarrassés de toute cellule cumulus résiduelle et congelés instantanément dans des tubes de 0,2 mL contenant moins de 1 µL de solution saline tamponnée au phosphate (1 X PBS). Afin de réduire la variabilité inter-échantillons, nous avons sélectionné des patientes présentant des caractéristiques démographiques et des paramètres de stimulation similaires (tableau supplémentaire 2 ). Au total, 86 ovocytes provenant de 24 patientes ont été sélectionnés pour le RNASeq : 28 pour Ctrl, 27 pour THC1 et 31 pour THC2. L'ADNc d'ovocytes individuels a été synthétisé à l'aide du kit SMART-seq v4 Ultra Low Input RNA Kit (Takara Bio Inc., Japon). L'ADNc amplifié a été purifié à l'aide de billes Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter, États-Unis) et élué. L'ADNc purifié a été quantifié à l'aide du test haute sensibilité Qubit dsDNA (ThermoFisher, Canada) et sa longueur et sa molarité ont été évaluées à l'aide du kit de fragments NGS DNF-474 HS (1-6000 pb) et de l'analyseur de fragments 5200 (Agilent Technologies, États-Unis). L'ADNc amplifié (0,2 ng) a été utilisé pour construire des bibliothèques de séquençage à l'aide d'un protocole de préparation de bibliothèque Nextera XT (Illumina, Canada) modifié et miniaturisé, développé pour une utilisation avec le robot de manipulation de liquides Mosquito HV (SPT labtech, Boston, États-Unis). La qualité des bibliothèques a été évaluée à l'aide du même kit d'analyseur de fragments DNF-474 HS NGS Fragment Kit (1-6000 pb), quantifiées à l'aide du test haute sensibilité Qubit dsDNA (ThermoFisher), normalisées et regroupées. Le séquençage a été réalisé sur une cellule à flux NovaSeq 6000 S2 (Illumina, Canada) au Centre de génomique Princess Margaret (2 × 150 pb) (Toronto, Canada). Les paramètres de contrôle qualité du séquençage sont compilés dans les données supplémentaires 6 .

Bioinformatique RNASeq d'ovocytes uniques
Les lectures de séquençage brutes ont été coupées en fonction de la qualité de lecture (Phred > 28) et alignées et quantifiées sur hg38 à l'aide de STAR (Spliced ​​Transcripts Alignment to a Reference ; v2.7.8a) 102 . Les transcrits peu abondants ont été exclus (maximum < 20) et normalisés à l'aide de la méthode de normalisation par défaut intégrée à DESeq2 (v3.5) 103 . Nous avons effectué une expression différentielle (DE) à l'aide de DESeq2 en comparant THC1 vs. Ctrl et THC2 vs. Ctrl. Les gènes significativement différentiellement exprimés ont été définis comme une valeur p < 0,05 et |log 2 fold change (FC)| de > 1. La liste complète des gènes DE est disponible dans les données supplémentaires 1 (THC1 vs. Ctrl) et les données supplémentaires 2 (THC2 vs. Ctrl)). Cette analyse a été réalisée dans Partek Flow (version 11.0.23.1004). Une analyse d'enrichissement des ensembles de gènes (GSEA) 104 , 105 a été réalisée afin de déterminer quels ensembles de gènes étaient affectés par l'exposition au THC. La liste des voies résultante a été croisée avec un ensemble de gènes personnalisé créé et soutenu par le Bader Lab (Université de Toronto), qui comprend tous les ensembles de gènes des bases de données GO, KEGG, Reactome et Wiki (v2024-01-01) ( http://download.baderlab.org/EM_Genesets/ ) 106 (Données supplémentaires 3 ). Les voies significatives ont été définies comme ayant un score d'enrichissement normalisé (NES) > 1,5 et une valeur p < 0,05.

Immunocoloration et imagerie
Après 24 h de culture, la zone pellucide (ZP) a été éliminée par incubation (30 s–2 min) avec la solution acide de Tyrode EmbryoMax® (Millipore Sigma, CA) et les corps polaires ont été séparés mécaniquement des ovocytes. Les ovocytes ont été immédiatement fixés avec du paraformaldéhyde à 3,7 % dans du PHEM (PIPES 12 mM, HEPES 5 mM, EGTA 2 mM et MgSO4・7H2O 0,8 mM, pH 6,9) pendant 30 min à température ambiante (TA), puis perméabilisés dans du PHEM + 0,25 % de Triton-X pendant 15 min à TA. Après perméabilisation, ils ont été incubés toute la nuit à 4 °C dans une solution de blocage (3 % d'albumine sérique bovine (BSA) + 0,05 % de Tween-20 dans du PBS 1X). Le lendemain, la plaque a été amenée à température ambiante avant de transférer les ovocytes dans la solution d'anticorps primaire pendant 1 h à 37 °C (souris anti-ɑ-Tubuline (1:250), T6199, Sigma-Aldrich, USA). Ensuite, les ovocytes ont été lavés trois fois dans la solution de lavage (0,5 % BSA + 0,05 % Tween-20 dans du PBS) à température ambiante, puis transférés dans la solution d'anticorps secondaire pendant 2 h à 37 °C (AlexaFluor 488 anti-souris de chèvre (1:200), A-11001, Invitrogen, États-Unis et AlexaFluor 555 phalloïdine (1:500) (A34055, Invitrogen, États-Unis). Après la solution d'anticorps secondaire, les ovocytes ont été lavés trois fois dans la solution de lavage et transférés dans du Hoechst 33342 (1:500) pendant 30 min. Enfin, les ovocytes ont été transférés dans des gouttes de 1,5 µL dans une boîte d'imagerie (Nunc Glass Bottom Dish, ThermoScientific, CA) recouverte d'huile de paraffine et des empilements z de 0,2 µm ont été capturés à l'aide d'un microscope confocal Leica SP8 en utilisant le Objectif 63× avec huile et zoom 8 à l'Advanced Optical Microscopy Facility (Toronto, Canada). La déconvolution a été appliquée aux images à l'aide du logiciel Huygens version 23.10 ( https://svi.nl/Huygens-Software ) et les images ont été visualisées avec ImarisViewer 10.1.1. Les témoins négatifs étaient constitués d'ovocytes GV pour observer l'absence de structure fusiforme et d'ovocytes MII colorés sans anticorps primaire anti-ɑ-tubuline de souris (Fig. 4 supplémentaire ).

Biopsie PB, amplification, séquençage et analyse du génome entier
Les corps polaires ont été séparés des ovocytes après retrait du ZP, éliminant ainsi toute contamination possible des cellules somatiques (comme illustré dans la figure supplémentaire 3 ). Les corps polaires ont été congelés individuellement à −80 °C dans moins de 2 µL et des échantillons en aveugle ont été envoyés pour une évaluation de la variation du nombre de copies chromosomiques (CNV) du génome entier à la plateforme de séquençage CReATe Reproductive Genetics. L'analyse CNV a été réalisée par séquençage de nouvelle génération du génome entier passe-bas en utilisant un flux de travail clinique validé sur la plateforme Illumina. En bref, l'ADNg a été amplifié à l'aide de SurePlex Whole Genome Amplification (WGA) (Illumina, CA), conformément aux instructions du fabricant. L'ADNg amplifié a ensuite été étiqueté et indexé à l'aide de Nextera XT (Illumina, CA). Les bibliothèques indexées ont été purifiées à l'aide de billes AMPure XP (ratio 1:1) et normalisées à l'aide de billes magnétiques. Les bibliothèques normalisées ont été regroupées, dénaturées et séquencées sur un NextSeq 550 (extrémité appariée, 2 × 75 pb). La version 6.0 de NxClinical (Bionano, CA) a été utilisée pour l'analyse CNV des chromosomes et la visualisation des données selon notre procédure clinique standard (2 millions de lectures/échantillon, résolution CNV de > 10 Mb). Les expériences d'optimisation ont démontré la concordance entre les nombres de chromosomes du globule polaire et de son ovocyte frère (Fig. 3 supplémentaire ).

Analyse statistique
Les ensembles de données ont d'abord été évalués pour la normalité à l'aide du test de Shapiro-Wilk. La signification statistique a été déterminée à l'aide du test exact bilatéral de Fisher pour l'analyse de contingence (taux de maturation, morphologie du fuseau et taux d'euploïdes), d'une ANOVA à un facteur avec un test de comparaison multiple bilatéral de Holm-Sidak pour les ensembles de données continues normalement distribuées (diamètre de l'ovocyte), ou d'un test de Kruskal-Wallis avec un test de comparaison multiple bilatéral de Dunn pour les ensembles de données continues non normalement distribuées. Le test statistique spécifique est indiqué dans les légendes des tableaux et des figures. La signification statistique a été définie comme p  < 0,05. Pour l'analyse rétrospective, nous avons effectué un appariement cas-témoins par paires, où chaque échantillon positif au THC a été apparié à deux échantillons négatifs au THC, comme déterminé par la présence/absence de 11-COOH-THC dans le FF. L'appariement a été réalisé à l'aide de la commande d'appariement FUZZY du logiciel Statistical Package for Social Sciences (SPSS-v29) en fonction des covariables suivantes : âge de l'ovocyte, indice de masse corporelle (IMC) des participantes, hormone antimüllérienne (AMH), hormone lutéinisante (LH) et hormone folliculo-stimulante (FSH) au jour 2/3, E2 (estradiol) au moment du déclenchement et dose totale de gonadotrophine (GT). L'AMH, la LH, la FSH et l'E2 ont été quantifiées lors de l'évaluation clinique à l'aide de l'instrument Cobas e411 (Roche, Bâle, Suisse). Le succès de l'appariement a été déterminé à l'aide d'un test bilatéral de Mann-Whitney pour la distribution non paramétrique. La signification statistique des résultats de la FIV a été déterminée à l'aide d'un test bilatéral de Mann-Whitney pour la distribution non paramétrique (taux de fécondation et d'euploïdie) et d'un test t bilatéral non apparié pour la distribution paramétrique (taux de maturation et de blastocystes) à l'aide de GraphPad Prism 10.2.3. Les chiffres entre parenthèses dans chaque légende de figure représentent des échantillons distincts et non des mesures répétées.

Résumé du rapport
De plus amples informations sur la conception de la recherche sont disponibles dans le résumé du rapport Nature Portfolio lié à cet article.

Disponibilité des données
Les données générées dans cette étude sont fournies dans le fichier d'informations supplémentaires/données sources. La matrice d'expression du nombre de lectures normalisé et les métadonnées ont été déposées dans la base de données Gene Expression Omnibus (GEO) sous le numéro d'accès GSE297757 . Pour des raisons de confidentialité des participants et de restrictions éthiques institutionnelles, les fichiers de séquençage bruts (fastq) ont été déposés aux Archives européennes du génome et des phénomènes (EGA), hébergées par l'Institut européen de bioinformatique (EBI) et le Centre de régulation génomique (CRG), sous le numéro d'accès EGAS50000001052 . De plus amples informations sur les EGA sont disponibles à l' adresse https://ega-archive.org . Le délai de réponse aux demandes d'accès est de 10 jours ouvrables et les données seront disponibles pendant toute la durée de l'étude, conformément à l'accord d'accès aux données associé à cet ensemble de données. Les données sources sont fournies avec cet article.

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Remerciements
CD a reçu une aide salariale grâce à la bourse postdoctorale Yuet Ngor Wong du Département de physiologie de l'Université de Toronto. Tous les autres fonds ont été fournis par le Centre de fertilité CReATe grâce au réinvestissement des revenus cliniques. Le matériel biologique humain et les données anonymisées associées ont été recueillis par le personnel de la biobanque CReATe. La biobanque CReATe est certifiée par le programme de biobanques du Réseau canadien de banques de tissus (RCBT). Les auteurs tiennent à remercier tous les membres du personnel, anciens et actuels, de la biobanque CReATe, du personnel clinique et du laboratoire de FIV du Centre de fertilité CReATe, du personnel de génétique de la reproduction CReATe et du personnel de recherche CReATe pour leur dévouement à cette étude. Enfin, les auteurs tiennent à remercier tous les patients pour le don de leur matériel biologique.

Informations sur l'auteur
Auteurs et affiliations
Centre de fertilité CReATe, Toronto (Ontario), Canada

Cyntia Duval, Brandon A. Wyse, Noga Fuchs Weizman, Iryna Kuznyetsova, Svetlana Madjunkova et Clifford L. Librach

Département de physiologie, Faculté de médecine Temerty, Université de Toronto, Toronto (Ontario), Canada

Cyntia Duval et Clifford L. Librach

Unité de FIV Racine, Maternité Lis, Centre médical Sourasky de Tel Aviv, Tel Aviv-Yafo, Israël

Noga Fuchs Weizman

Département d'obstétrique et de gynécologie, Faculté de médecine Temerty, Université de Toronto, Toronto (Ontario), Canada

Clifford L. Librach

Institut des sciences médicales, Faculté de médecine Temerty, Université de Toronto, Toronto (Ontario), Canada

Clifford L. Librach

Institut de recherche Sunnybrook, Toronto (Ontario), Canada

Clifford L. Librach

Contributions
CD, BW et NFW ont participé à la conception de l'étude. CD et BW ont établi la collection d'ovocytes humains immatures via la biobanque CReATe en collaboration avec IK et son équipe qui ont aidé à coordonner la collecte d'ovocytes. CD a reçu, cultivé et congelé les ovocytes pour toutes les expériences. CD a optimisé et réalisé la coloration des ovocytes et l'imagerie confocale, les biopsies des globules polaires et les manipulations liées au séquençage de l'ARN. CD et BW ont réalisé l'analyse transcriptomique. CD et BW ont compilé les données rétrospectives et analysé les résultats. SM et son équipe ont réalisé le séquençage des globules polaires pour évaluer le statut de ploïdie. CD et BW ont rédigé le manuscrit. CD a dessiné à la main tous les éléments graphiques. CL a fourni des commentaires critiques sur la conception de l'étude et le manuscrit. Tous les auteurs ont fourni des commentaires sur le manuscrit et ont lu et approuvé le manuscrit final.

Auteur correspondant
Correspondance à Cyntia Duval .

Déclarations éthiques
Intérêts concurrents
Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.

Évaluation par les pairs
Informations sur l'évaluation par les pairs
Nature Communications remercie Norbert Gleicher et les autres évaluateurs anonymes pour leur contribution à l'évaluation par les pairs de cet ouvrage. Un dossier d'évaluation est disponible.

Informations Complémentaires
Note de l'éditeur Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

Informations complémentaires
Informations complémentaires
Description des fichiers supplémentaires supplémentaires
Données supplémentaires 1
Données supplémentaires 2
Données supplémentaires 3
Données supplémentaires 4
Données supplémentaires 5
Données supplémentaires 6
Film supplémentaire 1
Film supplémentaire 2
Film supplémentaire 3
Résumé du rapport
Dossier d'évaluation par les pairs
Données sources
Données sources
Droits et autorisations
Libre accès. Cet article est sous licence Creative Commons Attribution - Pas d'Utilisation Commerciale - Pas de Modification 4.0 Internationale, qui autorise toute utilisation, tout partage, toute distribution et toute reproduction non commerciale, sur tout support et sous tout format, à condition de mentionner l'auteur(e) original(e) et la source, de fournir un lien vers la licence Creative Commons et d'indiquer si vous avez modifié le contenu sous licence. Vous n'êtes pas autorisé(e) par cette licence à partager du contenu adapté dérivé de cet article ou de parties de celui-ci. Les images ou autres contenus tiers contenus dans cet article sont inclus dans la licence Creative Commons de l'article, sauf mention contraire dans une ligne de crédit du contenu. Si le contenu n'est pas inclus dans la licence Creative Commons de l'article et que l'utilisation que vous prévoyez d'en faire n'est pas autorisée par la réglementation ou dépasse les limites autorisées, vous devrez obtenir l'autorisation directement auprès du détenteur des droits d'auteur. Pour consulter une copie de cette licence, rendez-vous sur http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ .

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